測定酶活力需要控制哪些條件

題目：

測定酶活力需要控制哪些條件

解答：

最適測定條件與條件的優化
國際臨牀化學聯合會（IFCC）和中華醫學會檢驗分會均推薦選擇在「最適條件」下測定酶活性濃度.所謂最適條件是指能滿足酶促反應速度達到最大反應速度所需的條件.包括：①合適的底物和最適底物濃度；②理想的緩衝液種類和最適離子強度；③反應液的最適pH；④最適反應溫度；⑤合適的輔因子、激活劑濃度；⑥若是酶偶聯反應,還需要確定指示酶和輔助酶的用量；⑦合理的測定時間,包括延滯期儘量短暫,有足夠的線性期；⑧合適的樣品與反應試劑的比例；⑨足夠的檢測範圍；⑩儘量去除各種抑制劑等.
1．底物濃度 除選擇適合的底物外,在實際應用中更多考慮的是底物濃度.由於[S]與反應速度V成雙曲線關係,在酶活性測定時,要求[S]達到一定水平以保證酶活性與酶量成正比.[S]範圍一般選擇在10～20Km爲宜,此時反應速度基本達到最大反應速度,測定的誤差在可接受範圍.
2．酶濃度 在反應條件一定時,酶濃度與反應速度成正比.按照中間產物學說,只有[S]>>[E]時,酶才能被底物分子飽和,反應速度才能達到最大值.因此當標本酶活力過高時,應將標本適當稀釋後再加以測定.
3．溫度 不同的酶最適溫度可以不同,多數酶的最適溫度在37～40℃,高於或低於最適溫度,酶活性都降低.目前,酶活性的測定溫度尚未統一,但常規實驗室多使用37℃.溫度對酶促反應的影響程度通常用溫度係數(Q10)表示.溫度係數指溫度每升高10℃,化學反應速度增加的倍數.Q10通常爲l～2.由溫度係數得知,溫度的變化對酶活性有著重要影響,因此要求酶活性測定要在恆溫條件下進行,溫度波動要控制在±1℃.
4．離子強度和pH值 在最適pH時,酶的活性最強,高於或低於最適pH,酶的活性都降低,多數酶的最適pH在5～8之間.在測定酶活性時,要求緩衝液具有足夠的緩衝容量,以便使pH值保持穩定.血漿或血清標本含有多種緩衝溶質,具有較強的緩衝能力.爲了防止血漿或血清標本緩衝溶質對反應液酸鹼度的影響,使pH不致偏離設定值,標本用量不宜過大,血漿或血清標本體積／反應液體積≤1／10爲宜.
5 輔助因子 某些金屬離子和維生素類輔酶是結合酶的輔助因子,例如Zn2+是羧基肽酶的輔基,Mo6+是黃嘌呤氧化酶的輔基,NADH是不需氧脫氫酶的輔酶.這些酶離開它們的輔基或輔酶就不能表現活性,因此在酶活性測定時,就要保證輔基或輔酶的供給.
6．激活劑 有些酶在有激活劑存在時才有活性或活性較高,例如Mg2+是肌酸激酶的激活劑,Cl-是澱粉酶的激活劑.因此在酶活性測定時,也要滿足酶對激活劑的需要.
7．抑制劑 酶的抑制可分爲不可逆抑制和可逆抑制,後者又可分爲競爭性抑制和非競爭性抑制.重金屬離子和砷化物對巰基酶的抑制、有機磷對羥基酶的抑制屬於不可逆抑制；丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制、磺胺類藥物對二氫葉酸合成酶的抑制屬於競爭性抑制；哇巴因對Na+,K+-ATP酶的抑制屬於非競爭性抑制.抑制劑使酶活性降低,在測定酶活性時,應避免抑制劑的影響.
綜上所述,測定酶活性時,最適條件的選擇應該遵循最適底物濃度、最適溫度、最適pH值、滿足輔助因子和激活劑、避免抑制劑的原則.