有目的基因,293t細胞,如何用慢病毒載體整合入293t細胞,

題目：

有目的基因,293t細胞,如何用慢病毒載體整合入293t細胞,

解答：

慢病毒包裝簡要程序(以六孔板中的1孔爲例)：
第一天：
1.用無抗生素DMEM+10%FBS鋪板293FT細胞,2ml/孔.確保第二天細胞密度達到80%-90%融合度
第二天：\x09\x09\x09
1.轉染293FT細胞.
1.500ul Opti-MEM稀釋2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2.500ul Opti-MEM稀釋15ul lipofectamine2000
3.5min後,將,溶液混合,室溫靜止30min\x09
4.從6孔板中吸出1ml培養基,然後滴加入1ml質粒和脂質體混合物.
2.6-10h後,移除含有DNA-脂質體複合物的培養基,代之以正常培養液DMED+
10%FBS（從此刻開始算時間）.
第三天：
3.轉染24h後,螢光顯微鏡下觀察,轉染效率應達到70%以上
第四天：
4.48h收穫含病毒的上清,0.45um濾膜過濾,同時再往6孔板中加入2ml完全培養基
4.感染細胞：用一份病毒液+2份完全培養基感染目的細胞.
第五天：
5.72h後再次收穫病毒上清.將昨天感染的細胞離心去除上清,然後再次感染目的細胞.
6.一般感染48h後,就能見到明顯的螢光.
再問： 2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G 這是什麼東西？你的內容是包裝試劑盒說明書上的吧，我要自己包裝，但很多試劑我沒有，比如Opti-MEM 脂質體2000