包涵體怎樣產生的,怎樣提高大腸桿菌中外源蛋白可溶性表達

題目：

包涵體怎樣產生的,怎樣提高大腸桿菌中外源蛋白可溶性表達

解答：

按基因工程定義：在某些生長條件下,大腸桿菌能積累某種特殊的生物大分子包涵體,它們緻密地集聚在細胞內,或被膜包裹或形成無膜裸露結構,這種水不溶性的結構稱爲包涵體.
簡單的說,就是外源基因在大腸桿菌胞內表達的過程中,因爲某些錯誤的摺疊,形成的不溶的無活性的固體顆粒.形成的原因很複雜,比如表達量過高,無法糖基化,組成中含有較多的半胱氨酸之類的胺基酸,離子鍵疏水鍵共價鍵共同的化學作用等.
提高可溶表達的方法也很多
1,降低誘導溫度,比如16度誘導.絕大多數蛋白質在降低誘導溫度後可以明顯提高可溶表達.
2,降低誘導劑的用量,比如0.1mM IPTG誘導.甚至更極端的可以不加誘導劑,形成洩漏表達.這種情況下表達出來的蛋白一定是可溶表達.
3,更換不同的表達載體,表達菌株.比如個人感覺pET28比pET21,Rosetta的菌株比BL21(DE3)更容易可溶表達.
4,更換表達系統增加信號肽,外源基因導入酵母系統或者哺乳動物細胞,只要是能分泌表達一定可溶性表達.