雙酶切線性DNA需要去磷酸化嗎,一條線性DNA分子,雙酶切,一個黏性末端,一個平末端,切好的DNA分子片段需要去磷酸化處

題目：

雙酶切線性DNA需要去磷酸化嗎,一條線性DNA分子,雙酶切,一個黏性末端,一個平末端,切好的DNA分子片段需要去磷酸化處理嗎,如果不處理,會不會在連接的時候不同片段的平末端之間直接相連導致最後測序的時候缺失序列!

解答：

平末端會存在這種情況.你連接的時候可以加點PEG,加大連接酶量,挑斑時多挑幾個單克隆,先自己做個PCR驗證或者雙酶切驗證,再送去測序.
再問： 我不連接質粒的，直接連結接頭，然後用接頭序列設計了引物，PCR產物直接測序···
再答： 這樣啊，那去磷酸化處理下比較好