怎樣從土壤中篩選微生物

題目：

怎樣從土壤中篩選微生物

解答：

原理：目前尚無一種培養基可以養出所有的微生物,但我們可以設計一種培養基,其組成份適合所要分離的微生物,而不利其他微生物的生長,如此一來,即使我們想分離的微生物爲數不多,也可以將它們分離出來,這就是選擇性培養基.本實驗就是使用選擇性培養基來分離土壤微生物,並計數它們的數量以及觀察在不同的選擇性培養基下,菌落型態的差異.
材料：分離細菌之培養基：TSA（Tryptic Soy Agar）、1/10 TSA 並分別添加100 ppm cycloheximide；分離放線菌之培養基：Alkaline Water Agar、Starch-Casein Agar並分別添加100 ppm cycloheximide；分離真菌之培養基：PDA（Potato Dextrose Agar）添加Triton X-100 (1 mg per mL)及100 ppm streptomycin sulfate、MRB（Martin’s Rose Bengal）再加入30 ppm streptomycin sulfate； (cycloheximide爲抑制真核細胞蛋白質合成之抗生素,請小心使用)、9毫升0.85%生理食鹽水、玻璃彎棒、酒精燈、少許農地表土.
步驟：
1.配製選擇性培養基.
2.秤過篩農土 1克置入9毫升生理食鹽水中,充分震湯混合,接著作10倍連續稀釋至適當的稀釋度.
3.取0.1毫升稀釋液塗抹於不同的選擇性培養基平板上.分離細菌取104、105及106倍稀釋之稀釋液；分離放線菌取103、104及105倍稀釋之稀釋液；分離真菌則取102、103及104倍稀釋之稀釋液.
4.塗抹過稀釋液之平板置於28℃培養箱中培養,按時觀察並記錄菌數、菌落型態、真菌孢子的顏色等.
5.另外,秤10克溼土置入玻璃燒杯中,於105℃下烘乾至恆重,將燒杯連烘乾後的土放入乾燥器中,冷卻至室溫後秤重,即可知每克溼土的乾重.將平板上的菌數除以乾重,就可以知道每克乾重土壤的菌數.
6.以t-test 做統計比較,細菌在相同養分但不同濃度下(TSA、1/10TSA)的數目有無差異；另外由分離放線菌的平板,純化 5個菌落型態不同之菌株,同時保留由真菌平板上所篩得的綠黴菌（Trichoderma spp.）,作爲下次實驗的材料.