請問心肌成纖維細胞怎樣培養?

題目：

請問心肌成纖維細胞怎樣培養?

解答：

博凌科爲生物科技-爲你用Langendorff灌流消化（膠原酶II）只能取得心肌細胞.建議直接將心臟剪碎,成纖維細胞我們這裡一般採用0.05％胰酶消化.無菌條件 取出心臟D-hank's液（PBS也可）漂洗,剪碎心臟加入5倍體積消化液,37C水浴3－5min,反覆吹打,靜置,待自然沉降後棄去上清液.剩餘沉 淀再加入約5倍體積0.08%胰蛋白酶及0.1%膠原酶II混合液,反覆吹打,大約10分鐘（消化時間往往靠經驗的判斷）,離心取沉澱重懸於含 20％BSA的DMEM（有條件可以用Cascade的培養液）.60－90min後更換培養液（差速貼壁,成纖維細胞比心肌細胞貼壁快）.1、胰酶的作用比較強烈,聯合使用膠原酶將膠原纖維充分消化後利於離心時細胞沉澱,提高細胞存活率.另外,消化時間不宜太長,主要憑觀察和經驗來判 斷.離心採用1000rpm 5min.2、酶的配置可以用d-Hank's液或生理鹽水都行.血清的作用主要是終止消化,用一般加了血清的DMEM就行,我們這裡是20％胎牛血清.3、貼壁時間：我師兄曾經告訴我2hr,現在我覺得90min已經很好了.4、細胞可以先用台盼藍測定存活率.5、鑑定：在倒置顯微鏡下觀察,細胞呈梭形、多角形,細胞質透明,細胞核大,呈橢圓形,常含有2－3 個核.IHC可以用I抗體（動物抗人B3、抗波形蛋白、抗血管平滑肌肌動蛋白）其餘基本按IHC的步驟來.