western blot等生物學試驗中的內參是什麼意思?

題目：

western blot等生物學試驗中的內參是什麼意思?

解答：

western blot用來檢測蛋白表達的變化,而檢測表達變化的前提就是,你每個孔跑得總蛋白量是相同的,如果上樣量都不同,還怎麼檢測不同組間目的蛋白量的區別,這樣內參就可以作爲檢測蛋白上樣量是否相同的標準.內參一般選那些表達水平比較固定的一些蛋白,比如說actin,這些蛋白的表達水平不會因爲你的實驗條件而改變,也就是說它始終就是表達那麼多,如果這些蛋白的表達量一樣,那麼我們就認爲總的蛋白是相同的.
再問： 那是不是內參曝光一次，樣品曝光一次呢？需要兩張膜？哎呀呀，我沒坐過western啊，東西都是文獻看的，但是很多不懂，導致文獻的圖都看不懂，求大神指教啊！！
再答： 肯定是在一張膜上做的啊。一般分這兩種情況： 一個是目的蛋白和內參蛋白的分子量相差較大，這個時候在轉膜之後，可以從中間剪開，然後分別雜抗體之後，再同時曝光。 第二種情況是兩者分子量相差很小，很難剪開，畢竟轉膜之後還看不到蛋白。此時可以有兩個方法：一是先雜一個蛋白抗體，再雜另一個蛋白的抗體，然後再一起曝光；另一種是先做完一個蛋白到曝光完成，然後用一種特殊的試劑，可以把之前的抗原抗體複合物拉下來，然後在雜另外一個蛋白。