如何檢測一個細胞中的蛋白質表達量?

題目：

如何檢測一個細胞中的蛋白質表達量?
問題是這樣的 我現在有個想法,就是驗證雜合子的蛋白表達含量比野生型的少~ 但是具體用什麼技術可以做到呢?或者提個思路也行啊~ 謝謝~

解答：

實時螢光定量PCR檢測mRNA的表達,然後westernblot檢測蛋白表達量.
再問： 您好~ 您現在有時間嗎？我想具體請教一下您~因爲我現在還是本科低年級學生，所以對這些還不是很懂。我的qq號是1992758183.。。。您能上qq和我具體說下嗎？真的很擺脫了~
再答： 沒有qq，就這裡問吧。首先你確定拿到了這兩種細胞系，通過PCR反應證明一個是野生型一個是突變型，即snp。然後用試劑盒提取RNA，設計引物，採用半定量或絕對定量的方法，測定mRNA表達水平；然後另取細胞裂解，提取總蛋白，用特異性抗體檢測蛋白表達量。很簡單，你問一個研究生就行。
再問： 那這種螢光定量測定的計數花費貴嗎？ 因爲我的實驗經費不是很多~ 還有我想問問您，據您所知，有沒有驗證過雜合型的細胞比野生型的蛋白表達量少？這個實驗可以定量做出來嘛？
再答： 編碼區突變很容易造成這種情況，螢光定量PCR需要專門儀器，各個實驗室收費不同，你一定有老師的，問問老師，他會有熟人，去測一下也許不花錢
再問： 恩~ 有是有老師~但老師是大忙人 不管我們這些本科生的。。。對了~ 您用過這個實時螢光定量pcr嗎？ 是能檢測出細胞中的mRNA的水平？？？
再答： 當然，必須用這個方法。
再問： 那實時螢光PCR不是要以mRNA爲模板？ realtime pcr 能夠以mRNA爲模板嗎？？？測量蛋白的表達量不能只做westernblot？
再答： real-time PCR功能很多的，可以測溶解曲線，甚至左高解析度溶解曲線，當然最常用的就是做mRNA表達了，要做定量mRNA表達當然要以mRNA爲模板，否則還做個什麼。當然，如果你就是想基因分型，那麼模板是DNA就可以了。mRNA提取質量是做實驗的關鍵，不要講解了，realtime定量的基礎就是CT值，初始載量不能如實反映試驗，那麼一定是假陽性或假陰性。做westernblot是非常必要的，但是不要忘記轉錄後調控，因此做出來mRNA表達升高，但是免疫印跡沒變化也別感到奇怪。當然最終起決定作用的還是蛋白表達量，那必須是免疫印跡做的。